Електростатични
Изтегляне 269.63 Kb.
|
- Навигация на страницата:
- Процеси, конкуриращи флуоресценцията
- 22 тема: FRET анализ: условия
- BRET анализ
| 21 тема:
Флуорофор - молекула, част от молекула или наночастица, която флуоресцира – поглъща енергия при определена дължина на вълната, след което отделя енергия (под формата на светлина) при друга дължина на вълната. Флуорофорите излъчват светлина – процесът се нарича флуоресценция. Флуорофорите: полиароматни ВВ, флуоресцентни наночастици Физични процеси, протичащи в рез. на взаимод. на светлина с орг.молек: флуоресценция на флуорофора (диаграма на Яблонски); тристепенен процес – възбуждане на флуорофора, престой във възбудено състояние, флуоресцентна емисия; Процеси, конкуриращи флуоресценцията: не всички възбудени молекули на флуорофора се връщат в основното си състояние чрез флуоресцентна емисия. Съществуват няколко конкурентни процеса, които протичат без излъчване на протони, водещи до намаляване интензитета на флуоресценция на флуорофорите: вътрешна конверсия, гасене на флуоресценция, флуоресцентен резонансен енергетичен пренос, нерадиационно релаксиране на флуорофора 22 тема: FRET анализ: условия – наличие на два или повече флуорофора, спектърът на емисия на донора трябва да препокрива спектъра на възбуждане (абсорбция) на акцептора и разстоянието м/у донора и акцептора да е 1-10 нм. Ако и трите условия са изпълнени – възможен е пренос на енергия от донора към акцептора и се регистрира флуоресцентна емисия; пример за ФРЕТ двойка е флуоресцеин/родамин BRET анализ: природен биофизичен феномен, подобен на ФРЕТ, но донорът на енергия е ензим-катализирана химична реакция; акцептор е някакъв флуорофор; пример за БРЕТ двойка е луцифераза/квантум дот ELISA: ELISA тестовете са основани на взаимодействията антиген-антитяло или лигандрецептор; използват се за анализ на антигени и антитела в телесни течности или биопсични препарати; Определено количество от даден антиген се имобилизира върху повърхността на микроплаката. Добавя се биологична проба, съдържаща съответното антитяло, чието наличие и количество трябва да бъде диагностицирано. Инкубира се за кратко време, при което се оформя комплекс антиген-антитяло. След това се отмива повърхността на плаката с буфер или физиологичен разтвор, за да се отстранят несвързаните компоненти от системата. Плаката се подлага на спектрален анализ. Изтегляне 269.63 Kb. Сподели с приятели:
|