Наредба №36 от 30 ноември 2005 Г. За изискванията към козметичните продукти



страница66/85
Дата22.07.2016
Размер7.31 Mb.
1   ...   62   63   64   65   66   67   68   69   ...   85


3.23. Индикаторни спрейове (проявяващи реактиви).

3.23.1. Diaso реагент.

От избрания реагент (3.14) се приготвя непосредствено преди употреба 5% (M/V) воден разтвор.

3.23.2. Реагент на Ehrlich.

Разтварят се 2,0 g п-диметиламинобензалдехид (3.16) в 100 cm3 (ml) воден разтвор на солна киселина 10% (M/V) (3.19).

3.23.3. 2,5-Диметилфенол-ферихлорид хексахидрат.

Разтвор 1: Разтваря се 1,0 g диметилфенол (3.17) в 100 cm3(ml) 96% етанол (3.3).

Разтвор 2: Разтварят се 4,0 g ферихлорид хексахидрат (3.18) в 100 cm3 (ml) 96% етанол (3.3).

За проявяване хроматограмата се пръска последователно с разтвор 1 и после с разтвор 2.

3.23.4. Сребърен нитрат - амонячен разтвор

Към 5% (M/V) воден разтвор на сребърен нитрат (3.15) се добавя 25% амоняк (3.4), докато утайката се разтвори. Приготвя се непосредствено преди употреба. Остатъкът от разтвора се изхвърля.

4. Апаратура

4.1. Стандартна апаратура за тънкослойна хроматография.

4.1.1. Пластмасов или стъклен капак с конструкция, която осигурява хроматографската плака да е в азотна атмосфера при проявяване и сушене на петната. Тази предпазна мярка е необходима поради податливостта на някои багрила към окисление.

4.1.2. Микроспринцовка от 10 µl, градуирана през 0,2 µl, с игла с квадратно сечение или препоръчително дозаторно устройство от 50 µl, монтирано върху скобата на статива, така че плаката да бъде под азот.

4.1.3. Тънкослойни силикагелни плаки 20 x 20 сm с дебелина на слоя 0,25 mm (Macherey and Nagel, Silica G-HR или еквивалентни).

4.2. Центрофуга, 4000 rpm.

4.3. Центрофужни епруветки, 10 cm3 (ml), с полиетиленови капачки на винт или еквивалентни.

5. Процедура

5.1. Подготовка на пробите

При изстискване на тубата първите 2-3 cm се отстраняват. В центрофужна епруветка (4.3), предварително продухана с азот, се поставят 300 mg аскорбинова киселина и 3,0 g кремообразна или хомогенизирана течна боя. Добавя се 25% амоняк (3.4) на капки до рН 10. Долива се до 10 cm3 (ml) с 96% етанол (3.3), хомогенизира се под азот (3.8), ценрофугира се 10 min при 4000 rpm. Изследва се горният слой на течната фаза.

5.2. Хроматографски анализ

5.2.1. Нанасяне на разтворите върху плаките

На хроматографската плака (4.1.3) се маркира стартова линия на 1,5 cm от ръба й. Върху 9 точки се нанасят по 1,0 µl от стандартните разтвори в посочения ред:

1

2

3

4

5

6

7

8

9

Р

П

Х

п-ФДА

ДАФ

п-ТДА

о-ФДА

о-ТДА

м-ФДА

м-ТДА

алфа-Н

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Върху точки 10 и 11 се нанасят по 2,0 µl от разтвора на пробата (5.1).

Нанасянето на стандартите и пробите се извършва под азот (3.8) и плаката се държи под азот до момента на хроматографирането.

5.2.2. Хроматографско разделяне

Хроматографската вана е предварително продухана с азот (3.8) и наситена с една от четирите подвижни фази (3.22). Плаката се поставя във ваната при стайна температура (20°С до 25°С) на тъмно, докато фронтът достигне 15 сm от стартовата линия, след което се изважда и изсушава под азот (3.8) при стайна температура.

5.2.3. Проявяване на петната

Плаката се напръсква веднага с един от четирите разтвора, описани в 3.23.

5.2.4. Идентифициране

Сравняват се Rf-стойностите и цветовете на получените петна от пробата с тези на стандартните разтвори.

В табл. 1 са представени Rf-стойностите и цветовете на петната на всички стандартни субстанции в съответните подвижни фази и използваните проявяващи реактиви.

По тази методика понякога може да се получи спорна идентификация при сравняване на петната на съответните стандартни субстанции с тези на пробата.

5.2.5. Полуколичествено определяне

Сравнява се визуално интензивността на петната на всяко вещество, идентифицирано съгласно 5.2.4 със серия от стандартни разтвори с подходяща концентрация.

Ако концентрацията на една или повече субстанции в пробата е много висока, пробата се разрежда и определението се повтаря.

Таблица 1

Rf - стойности и цветове на петната, получени веднага след напръскването

 

Стандартна

Подвижна фаза

Индикаторни спрейове

субстанция

 

(проявяващи реактиви)

(3.20)

Rf стойности

Цветове на получените петна

 

(3.22.1)

(3.22.2)

(3.22.3)

(3.22.4)

Diaso

Ehrlich

Диметил

Сребърен

 

 

 

 

 

(3.23.1)

(3.23.2)

фенол

нитрат

 

 

 

 

 

 

 

(3.23.3)

(3.23.4)

о-ФДА

0,62

0,60

0,30

0,57

Бледокафяв

-

-

Бледокафяв

м-ФДА

0,40

0,60

0,47

0,80

Виолетово-

Жълт

Бледо-

Бледо-

 

 

 

 

 

кафяв(*)

 

кафяв

кафяв

п-ФДА

0,20

0,50

0,30

0,48

Кафяв

Светло-

Виолетов

Сив

 

 

 

 

 

 

червен(*)

 

 

о-ТДА

0,60

0,60

0,53

0,60

Кафяв(*)

Бледо-

Бледо-

Сиво-

 

 

 

 

 

 

оранжев

кафяв

кафяв

м-ТДА

0,40

0,67

0,45

0,60

Червено-

Жълт

Кафяв

Черен

 

 

 

 

 

кафяв(*)

 

 

 

п-ТДА

0,33

0,65

0,37

0,70

Кафяв

Оранжев

Виолетов(*)

Сив

ДАФ

0,07

-

0

0,05

Кафяв(*)

Оранжев

Виолетов

Кафяв

Х

0,50

0,35

0,80

0,20

-

Оранжев

Виолетов

Черен(*)

алфа

0,90

0,80

0,90

0,75

Оранжево-

-

Виолетов(*)

Черен

 

 

 

 

 

кафяв

 

 

 

П

0,37

-

0,67

0,05

Кафяв

Много бледо-

Много бле-

Кафяв(*)

 

 

 

 

 

 

виолетов

докафяв

 

Р

0,50

0,37

0,80

0,17

Оранжев

Бледо-

Много бледо-

Бледо-

 

 

 

 

 

 

виолетов

кафяв

кафяв

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Ако концентрацията на една или повече субстанции в пробата е много висока, пробата се разрежда и определението се повтаря.

Забележка:

1. о-ФДА се проявява слабо; трябва да се използва подвижна фаза (3.22.3), за да се разграничи ясно от о-ТДА.

2. (*) показва най-добро развитие на цвета.

6. Изпитване с двупосочна тънкослойна хроматография

Двупосочната хроматографска процедура изисква употребата на допълнителни стандарти и реактиви.

6.1. Допълнителни стандартни разтвори и субстанции

6.1.1. -Нафтол (-Н).

6.1.2. 2-Аминофенол (о-АФ).

6.1.3. 3-Аминофенол (м-АФ).

6.1.4. 4-Аминофенол (п-АФ).

6.1.5. 2-Нитро-1,4-фенилендиамин (2-НПФДА).

6.1.6. 4-Нитро-1,2-фенилендиамин (4-НОФДА).

Приготвят се 0,5% (M/V) разтвори на всички допълнителни стандартни субстанции, както е описано в 3.21.

6.2. Допълнителна подвижна фаза

6.2.1. Етилацетат:циклохексан:амонячен разтвор (25%) = 65:30:0,5 (V/V/V).

6.3. Допълнителна индикаторна система за проявяване на петната

Във ваната за тънкослойна хроматография се поставя стъклен съд с 2,0 g йодни кристали и ваната се затваря с подходящ капак.
1   ...   62   63   64   65   66   67   68   69   ...   85


База данных защищена авторским правом ©obuch.info 2016
отнасят до администрацията

    Начална страница