Научни резултати постигнати при разработването на изследователски проекти, финансирани от му – София

1. Лилия Александрова Витанова, д.м., доцент, катедра по физиология, МФ София

2. Лиляна Лазарова Митова, д.м., доцент, катедра по физиология, МФ София

3. Елка Бориславова Попова, д.м., доцент, катедра по физиология, МФ София

4. Петя Николова Купенова, главен асистент, катедра по физиология, МФ София

6. АДРЕС ЗА КОНТАКТИ: катедра по физиология, Медицински факултет, ул. „Г.Софийски”1, София 1431; сл.тел. 9172-544, дом.тел. 231647

Разпределението на глицина и глициновите рецептори (GlyRs) в ретините на жаба (Rana ridibunda, Xenopus laevis) и костенурка (Emys orbicularis) бе изследвано имуноцитохимично. Глицинът бе локализиран в телата на глицинергичните амакринни и интерплексиформени клетки на всички изследвани типове ретина. Маркирани имуноцитохимично бяха също така и израстъците на тези неврони във външния (ВнПС) и вътрешния (ВтПС) плексиформени слоеве. Глициновите рецептори бяха изследвани с помощта на четири антитела: mAb4a, насочено спрямо всички субединици на глициновия рецептор, и GlyRα1, GlyRα2 и GlyRα3, насочени съответно към α1, α2 и α3 субединиците на рецептора. С помощта на mAb4a глициновите рецептори бяха демонстрирани под формата на ярки флуоресциращи точки във ВнПС и ВтПС на изследваните от нас ретини, където те бяха организирани в няколко хоризонтални ламини. GlyRα1-, GlyRα2- и GlyRα3- имунофлуоресценциите, изявени със съответните антитела, не бяха равномерно разпределени, а показваха начин на стратификация, специфичен за всяка една от субединиците. Направен бе изводът, че във всеки един тип ретина са изявени няколко изоформи на α субединицата, които участват във формирането на различни синапси и изпълняват, по всяка вероятност, различни функции.

1. Vitanova L., S. Haverkamp, H. Waessle. Immunocytochemical Localization of Glycine and Glycine receptors in the Retina of the Frog Rana ridibunda.

Cell and Tissue Ressearch, 2004, 317, 227-235. (IF 2,245 ).

2. Vitanova L. Immunocytochemical study of glycine receptors in the frog retina of Xenopus laevis. Arch. Physiol. Biochem., 2005 (in press).

1. Vitanova L., S. Haverkamp, H. Waessle. Glycine and glycine receptors in the retina of the frog Rana ridibunda, an immunocytochemical study. Fifth national congress of pharmacology and toxicology. Sofia, Bulgaria, oct. 2004. Abstracts, P153, p.200.

***

1. Ваня Иванова Цветкова, фармацевт, докторант по фармакология

2. Елена Любчева Павлова, студент по медицина VI курс

3. Николай Александров Стойнев – студент по медицина, V курс

4. Адула Сриватсави - студент по медицина VI курс

5. Дипак Тампи Хариндран - студент по медицина VI курс

Опитите бяха проведени на мъжки бели плъхове, порода Wistar 180-200г. Остра и хронична възпалителна хипералгезия се предизвикваше чрез интраплантарно инжектиране на 0.1% карагеенан и Freund’s adjuvant. Ефектите се обективизираха с апарати на Ugo Basile: тест за натиск (PPT), теск за нарушена функция на лапите |Incapactance (ICT) test], плетизмометрия, гореща плоча (HP) и tail flick (TF). Плъховете бяха третирани с бенфотиамин или тиамин (10, 50 и 100 мг/кг), indomethacin 2, 5 mg/kg и morphine2,5; 5; 10 mg/kg. За предизвикване на толерантност към аналгетичния ефект, morphine се инжектираше ежедневно в продължение на 10 дни, сутрин в доза 5 мг/кг и вечер 10 мг/кг. Промените в аналгетичния ефект на морфин се проследяваха през ден (развитие на толерантност). За обективизиране силата на абстиненцията, третираните 7-11 дни с морфин и морфин + бенфотиамин се инжектираха с налоксон 1 мг/ кг. Тиамин и бенфотиамин, приложени самостоятелно нямат аналгетичен и антиексудативен ефект. Бенфотиамин засилва аналгетичния ефект на еднократна доза морфин при HP тест. Продължителното прилагане на бенфотиамин с морфин води до забележимо отслабване развитието на толерантност към аналгетичния ефект на морфина. Бенфотиамин отслабва значително силата на абстинентни прояви като: загуба на тегло, прострация, птоза, восъчна фигура. Бенфотиамин засилва аналгетичния ефект на индометацин при модели на възпалителна хипералгезия, без да засилва антиексудативното действие на индометацин. Продължителното прилагане на индометацин води до намаляване теглото на експерименталните животни. Ко-третирането с бенфотиамин резултира в атенюиране на този нежелан ефект. Benfotiamine е подходящ адювант при лечение на болка с неопиоидни и опиоидни аналгетици.

1. Tzvetkova, V., Kraevsky, P., Kasakov, L., Vlaskovska, M. Effect of Benfotiamine on morphine analgesia and tolerance/dependence. Comptes rendus de l’Academie bulgare des Sciences (submitted)

2. Tvetkova, V., Kasakov, L., Vlaskovska, M. Effect of Benfotiamine and indomethacin alone and in combination on inflammatory hyperalgesia (manuscript in preparation for . Comptes rendus de l’Academie bulgare des Sciences.

НАУЧНИ ПРОЯВИ:

1. Tzvetkova, V., Pavlova, E., Harindram, D., Vlaskovska, M., Kasakov, L. Effect of Benfotiamine on heat induced nociception: modulation of acute morphine induced analgesia. 3^rd International Congress of Medical Sciences, 13-16 May 2004, Sofia, Abstacts p. 27.

2. Tzvetkova, V., Stoynev, N., Srivatsavi, A., Kasakov, L., Vlaskovska, M. Comparative studies of the effect of benfotiamine and thiamine on the inflammatory hyperalgesia and edema. 3^rd International Congress of Medical Sciences, 13-16 May 2004, Sofia, Abstacts p.30.

3. Tzvetkova, V., Pavlova, E., Stoinev, N., Vlaskovska, M., Kasakov., L. Comparative studies of the effect of benfotiamine and thiamine on experimental inflammatory and heat-induced pain. II Natioal conference for the treatment of pain, 24 – 26 June 2004, Bansko; Abstracts, p. 60.

4. Tzvetkova, V., Kraevsky, P., Smilov, I., Vlaskovska, M., Kasakov, L. Comparative studies of the effect of benfotiamine and thiamine on the development of tolerance/dependence to morphine. II Natioal conference for the treatment of pain, 24 – 26 June 2004, Bansko; Abstracts, p.61.

5. Tzvetkova, V., Kasakov, L., Vlaskovska, M. Comparative studies of the effect of benfotiamine and thiamine on the anti-inflammatory and analgesic action of indomethacin. II Natioal conference for the treatment of pain, 24 – 26 June 2004, Bansko; Abstracts, p.62

6. Tzvetkova, V., Kasakov, L., Vlaskovska, M. Effect of benfotiamine and thiamine on the anti-inflammatory and analgesic action of indomethacin. Vth National Congress of Pharmacology and toxicology, 21-23 October 2004, Sofia, Abstr. p. 83

7. Tzvetkova, V., Kraevsky, P., Vlaskovska, M., Kasakov, L. Effect of benfotiamine and thiamine on the development of tolerance/dependence to morphine. Vth National Congress of Pharmacology and toxicology, 21-23 October 2004, Sofia, Abstr. p. 83-84.

8. Tzvetkova, V., Pavlova, E., Stoinev, N., Vlaskovska, M., Kasakov, L. Effect of benfotiamine and thiamine on experimental inflammatory and heat-induced pain. . Vth National Congress of Pharmacology and toxicology, 21-23 October 2004, Sofia, Abstr. p. 84-85.
Научният отчет е приет с ОТЛИЧНА оценка по скалата на Съвета по медицинска наука.
***
ДОГОВОР № 27 / 2004 г.

НАУЧНО НАПРАВЛЕНИЕ: ТЪКАНИ И КЛЕТКИ; ИМУННА СИСТЕМА; БИОХИМИЯ. МЕТАБОЛИЗЪМ; МОЛЕКУЛЯРНА БИОЛОГИЯ И ГЕНЕТИКА

ТЕМА НА ИЗСЛЕДОВАТЕЛСКИЯ ПРОЕКТ: РЕГУЛАЦИЯ НА ТИРОЗИНОВОТО ФОСФОРИЛИРАНЕ ПО ВРЕМЕ НА CD40-МЕДИИРАНОТО ПРЕДОТВРАТЯВАНЕ НА ИГМ-МЕДИИРАНАТА АПОПТОЗА В RAMOS-BL В КЛЕТКИ

ПЕРИОД НА ФИНАНСОВА ПОДКРЕПА: 2004 година

ВОДЕЩ ИЗСЛЕДОВАТЕЛ: АС.КРУМ КРУМОВ ХРИСТОВ

ЧЛЕНОВЕ НА ИЗСЛЕДОВАТЕЛСКИЯ ЕКИП:

1. АС.КРУМ КРУМОВ ХРИСТОВ, КАТЕДРА ПО ХИМИЯ И БИОХИМИЯ

2. ПРОФ.ВАНЬО ИВАНОВ МИТЕВ, ДБН, КАТЕДРА ПО ХИМИЯ И БИОХИМИЯ

3. ВЕСЕЛА УЗУНОВА, КАТЕДРА ПО МИКРОБИОЛОГИЯ

Регулирането на тирозиновото фосфорилиране е необходимо за В-клетъчните реакции по време на селекцията им в герминалните центрове. Ние определихме късните промени в тирозиновото фосфорилиране след стимулирането на CD40 и АгР на Ramos-BL B клетките. Ко-стимулирането на CD40 на анти-ИгМ-третирани Ramos-BL B клетки предотвратява растежният арест и апоптозата дори когато CD40 е стимулиран 12 hr след активирането на АгР. Началното повишение на тирозиновото фосфорилиране след стимулирането на АгР се следва от тирозиново дефосфорилиране след 12 hr, съвпадащо с активирането на каспаза-3 и протеолитичното разцепване на PARP. Стимулирането на CD40 предотвратява активирането на апоптотичните каскади от АгР само когато Ramos-BL B клетките са третирани с анти-CD40 преди необратимото инхибиране на тирозин киназната активност. Тово показва значението на късната регулация на тирозиновото фосфорилиране от CD40 за позитивната селекция на В клетките. Значението на протеиновата синтеза за сигналните каскади на АгР беша определено синхибиторите actinomycin D (ACD) и cycloheximide (CHX). ACD и CHX инхибират пролиферацията и индуцират апоптоза по доза-зависим начин. Въпреки че ниските концентрации на ACD и CHX инхибират пролиферацията на Ramos-BL B клетките, предотвратяват апоптозата след стимулиране на АгР. 0.03 μg/ml ACD инхибира АгР-медиираната апоптоза с 72%. Само частично инхибиране на апоптотичният отговор се наблядава след третиране с 1 – 3 μg/ml CHX. ACD и CHX регулират про- и анти-апоптотичните сигнални прагове в зависимост от молекулярния контекс на клетките.

1. Христов К.К. и В.И. Митев Селекция на В лимфоцити в периферните лимфни тъкани. Алергии, Хиперсензитивност, Астма 1, 2003, №2, 15 – 20

2. Христов К.К. и В.И. Митев Тирозин кинази и фосфатази определящи съдбата на В лимфоцитите. Алергии, Хиперсензитивност, Астма 2, 2003, №1, 26 – 33

3. Hristov K.K. and V.I. Mitev Selection of B cells – Avoiding reaction to self. Allergy, Hypersensitivity, Asthma 1, 2004, №2, 15 – 19

4. Hristov K.K. and V.I. Mitev B cell tyrosine kinases and tyrosine phosphatases. Allergy, Hypersensitivity, Asthma 2, 2004, №1, 24 – 30

5. Hristov K.K., K.A. Knox and V.I. Mitev Ramos-Burkitt lymphoma cell line – a model for selection of B-cells in the germinal enters. Allergy, Hypersensitivity, Asthma 3, 2005, №1, 9 – 15

6. Hristov K.K., K.A. Knox and V.I. Mitev Differential regulation of Ramos Burkitt’s lymphoma B cell line proliferation and antigen receptor-triggered apoptosis following macromolecular protein synthesis inhibition. (in press)

7. Hristov K.K., K.A. Knox and V.I. Mitev Regulation of the tyrosine phosphorylation during CD40-mediated rescue of Ramos-BL B cells from BCR-triggered apoptosis. (in press)

8. Hristov K.K., K.A. Knox and V.I. Mitev Differential regulation of SHP1 and SHP2 tyrosine phosphatases expression and phosphorylation during CD40-mediated rescue of BCR-triggered apoptosis. (in press)

Научният отчет е приет с ОТЛИЧНА оценка по скалата на Съвета по медицинска наука.

***
ДОГОВОР № 8 / 2004 г.

Д-р Димитрина Кирилова Димитрова-Диканарова, Доктор (дм); Доцент по Биология

1. Проф. д-р Захарий А. Кръстев, д.м.н., Ръководител на Клиниката по Гастроентерология, Ръководител на Катедрата по Вътрешна медицина, МУ, София, Клиника по Гастроентерология, Университетска Болница, “Св. Иван Рилски”, бул. “Д. Несторов” 15, 1431 София, България;

2. Д-р Нина Юри Петкова, специализант в Клиниката по Гастроентерология, Университетска Болница, “Св. Иван Рилски”, бул. “Д. Несторов” 15, 1431 София, България;

3. Проф. д-р Людмил Ст. Наков, д.м.н., консултант по проекта.

Посредством аглутинационни тестове, спермоимобилизационен тест (SIT) и ELISAsp бяха изледвани за спермоантитела (СА) серуми от пациенти: с гастродуоденални заболявания, с клинична картина на инфекции, причинени от H. pylori (Hp инф.), (n=106) и с безплодие (БП), (n=106), както и контролна група кръводарители (КД) без субективни оплаквания и доказан фертилен статус (n=104). Титърът и активността на IgG антителата срещу специфичните рекомбинантни антигени на H. pylori бяха определени чрез ELISAHp при използване като антигени на recomWell Hp (Microgen GmBH).

Установена беше статистически значимо по-висока честота на СА (P<0.0001) при БП в сравнение с КД и пациентите с Hp инф., както и при пациентите с Hp инф. (P<0.001) по отношение на КД. Не беше доказана статистически значима разлика (P>0.05) в честотата на anti-Hp Abs между трите изследвани групи. При пациентите с Hp инф. беше наблюдавана силно значима отрицателна линейна корелация между anti-Hp Abs и СА в ELISAsp (r= 0.2725, P=0.0051). При КД беше доказана статистически значима положителна корелация между anti-Hp Abs и СА в SIT (r=0.2876, P=0.0031). Абсорбцията с човешки сперматозоиди редуцираше пълно спермоимобилизационната активност на всички положителни в SIT серуми и не понижаваше значимо активността на положителните в ELISAsp и ELISAHp серуми.

Получените от нас резултати потвърждават идеята, че инфекциите, причинени от H. pylori, биха могли да доведат до нарушения в разпознавателния механизъм на имунната система и до развитието на имунен отговор срещу естествени, същински автоантигени, вкл. и срещу сперматозоидни антигени.

1. Dimitrova D.K., Z.A.Krastev, E.B.Gigov, N.U.Petkova and L.S.Nakov. Association between Helicobacter pylori infection and the presence of antisperm antibodies? European Journal of Gastroenterology&Hepatology, 2005 (publication in extenso).

1. Димитрова Д. К., З. Кръстев, Е. Гигов, Н. Петков, Л. Наков. Асоциация между инфекции, причинени от Helicobacter pylori и наличието на спермоантитела? Шести национален конгрес по стерилитет, контрацепция и хормонозаместителна терапия с международно участие, 13-16.03.2005, Боровец, България, резюме на доклад в секция “Медико-биологични аспекти на стерилитета”, 02-1.

2. Димитрова Д. К., З. Кръстев, Е. Гигов, Н. Петков, Л. Наков. Инфекции, причинени от Helicobacter pylori и спермоантитела. Шеста национална конференция по Медицинска Биология, 22-23.09.2005, Стара Загора, България, резюме на доклад.

Научният отчет е приет с ВИСОКА оценка по скалата на Съвета по медицинска наука.

***
ДОГОВОР № 28 / 2004 г.

1. Светослав Радоев Кръстев, магистър по биология, главен асистент, катедра “Химия и Биохимия”, ПУЦ, МУ-София

2. Бригита Иванова Радева, доктор по медицина, главен асистент, катедра Педиатрия, Клиника по Клинична Генетика, СБАЛДБ

АДРЕС ЗА КОНТАКТИ: катедра “Химия и Биохимия”, ПУЦ, Медицински Университет, ул. “Здраве” №2, г. София 1431, Тел.: 9172 692

БАЗОВА ОРГАНИЗАЦИЯ: Медицински факултет, Предклиничен университетски център, Катедра по Химия и биохимия, ул. Здраве 2, 1431 София

РЕЗУЛТАТИ:

ЦЕЛ: Проектът цели да бъдат проучени генните мутации в българската популация, водещи до синдрома на Lesch-Nyhan иустановяване на носителството на мутантния ген. МАТЕРИАЛИ ИМЕТОДИ: Установяване на носителство чрез култивиране на Т-лимфоцити от пириферна кръв в селективна тиогуанинова среда. ДНК от майките на засегнатите деца бяха използвани за намножаване на промоторния и кодиращите участъци от HPRT -гена с PCR-амплификация. Получените продукти бяха подложени на директно ДНК секвениране. РЕЗУЛТАТИ: До момента са установени и диагностицирани два случая на синдрома на Lesch-Nyhan от две различни фамилии с доказана нулева активност на HPRT. От направените експерименти се установява, че едното от засегнатите деца е жертва на de novo мутация, тъй като майката не е носител, а второто дете е унаследило мутантния HPRT ген от майката, която се оказва носителка.

***
ДОГОВОР № 29 / 2004 г.

1. Александрина Борисова Александрова, гл.асистент, Клиника по коремна хирургия, КЦГЕ, УМБАЛ “Царица Йоанна”

2. Димитър Георгиев Недин, дм, гл.асистент, Клиника по коремна хирургия, КЦГЕ, УМБАЛ “Царица Йоанна”

АДРЕС ЗА КОНТАКТИ: Медицински Факултет, Катедра “Химия и Биохимия”, ул. “Здраве”№2; София-1431; тел. служебен- 9172694, мобилен-0889025275, e-mail- alextanya@excite.com

БАЗОВА ОРГАНИЗАЦИЯ: Медицински Факултет, Катедра “Химия и Биохимия”

РЕЗУЛТАТИ:

В настоящото проучване, генотипиране чрез RFLP анализ на PvuII и XbaI маркерите от гена за естрогеновия рецептор беше осъществено за 140 случая с колоректален карцином (КРК) и 77 контроли. Не бяха наблюдавани статистически значими различия между двете изследвани групи. След разделяне на групата пациенти според наличието или липсата на микросателитна нестабилност (МСН) и поотделното им сравнение с контролната група, както и помежду им, се наблюдават значими различия както при сравнението на алелните (p<0.01за PvuII и p<0.05 за XbaI маркера), така и на генотипните честоти (p<0.007за PvuII и p<0.03 за XbaI маркера).

Генотипиране чрез RFLP анализ на BsmI маркера от гена за витамин Д рецептора беше осъществено за 133 случая с колоректален карцином (КРК) и 94 контроли. Алелните честоти на контролите и групата пациенти не показаха различия. Разпределението на генотипните честоти показа, че bb генотип е по- чест при пациентите (p<0.04). Наблюдава се засилване на статистическата значимост при изключване на групата, показала МСН.

Може да се заключи, че тези полиморфизми могат да послужат като прогностичен белег за развитието на МСН фенотип.

1. Подготвена за подаване и рецензиране в научно списание “Cancer Causes and Control”: Associaciation between vitamin D and estrogen receptor polymorphisms and colorectal

cancer in Bulgaria. Kadiyska Т. К., T. Iakulov, M. Tzancheva, D. Nedin, A. Alexandrova, A. Gegova, A. Savov, V. Mitev, I. Kremenski

НАУЧНИ ПРОЯВИ:

1. Kadiyska Т. К., T. Iakulov, M. Tzancheva, D. Nedin, A. Alexandrova, A. Gegova, A. Savov,

V. Mitev, I. Kremenski, Associaciation between vitamin D and estrogen receptor polymorphisms and colorectal cancer in Bulgaria, 6th BALKAN MEETING ON HUMAN GENETICS (BMHG 2004), THESSALONIKI GREECE, AUGUST 28 - 31, 2004

Научният отчет е приет с ВИСОКА оценка по скалата на Съвета по медицинска наука.

***
ДОГОВОР № 25 / 2004 г.

Разработен бе нов метод за едновременно количествено определяне на АК, ПА и СА чрез ВЕТХ след предколонна дериватизация с N-(-9-флуоренил метоксикарбонилoкси) бензотриазол (Fmoc-OBt). При разработването на методиката бе използван нов химически реагент за въвеждане на 9-флуоренилметоксикарбонилна (Fmoc) група като флуоресцентен маркер.

Валидирането на аналитичния метод показа, че линейността и възпроизводимостта за всички изследвани компоненти са в необходимите граници за да може методиката да се използва в практиката.

Направените литературни справки показаха, че нашата аналитична методика е оригинална и уникална, а също така и че е единствения метод позволяващ едновременното количествено определяне на АК, ПА и СА.

***