Институт за контрол на ветеринарномедицински продукти
|
Версия: 02/ 11.06.2009г.
|
Лист
|
Стандартна оперативна процедура 029
ИЗВЪРШВАНЕ НА РЕАКЦИЯ СТЕПЕННА АГЛУТИНАЦИЯ
|
Изменение ......./……………
|
-
ЦЕЛ
Целта на тази стандартна оперативна процедура е да се докаже специфичността и количеството на получените антитела в серуми на ваксинирани опитни животни и хиперимунни серуми /ХИС/ чрез бавна аглутинация,при изпитване на бактериални имунологични ВМП за активност и имуногенност.
-
ОБХВАТ
Оценка на напрежението на имунитета, чрез свързване на антиген и антитяло и проследяване активността на ИВМП.
-
ЧЕСТОТА НА ПРИЛОЖЕНИЕ
Методът се използва при ИВМП, когато е посочен в документацията на ВМП за доказване на неговата активност и имуногенност и като скрининг тест.
-
АПАРАТУРА И МАТЕРИАЛИ
Апаратура: Центрофуга, хладилник, автоклав, инкубатор, микроскоп
Помощни материали: стативи, стерилни епруветки, пипети, епендорф епруветки, ерленмаерови колби
Консумативи: физиологичен разтвор, бульони, агар, хиперимунни серуми, антигени-живи или убити бактериални суспензии, серуми от ваксинирани животни, контролни нулеви серуми, стандарти
-
ОТГОВОРНОСТИ
Ръководителят на лабораторията носи отговорност за извършване на реакцията.
-
ПРОЦЕСНА КАРТА
-
ПРОЦЕДУРА
Действие
|
От кого се извършва
|
Кога се извършва
|
Как се извършва
|
1. Разреждане на серум
|
лаборант
|
Преди изпитването
|
Изпитваните серуми се разреждат двукратно, или десетократно според търсения титър с физ. разтвор и участват в реакцията в обем 0,5 мл. Разрежданията се извършват в стандартни епруветки.
|
2. Добавяне на антиген 1
|
лаборант
|
След извършване на разреждане на серума
|
Във всички епруветки се добавя по 0,5 мл антиген. Към редицата от опитните епруветки се прибавят контроли на изпитваните серуми и контрола на антигена.
|
3.Инкубиране
|
лаборант
|
След добавяне на серум и антиген
|
Епруветките се поставят в инкубатор при 37о С за 18-20 часа и след 1-2 часа на стайна температура
|
4. Отчитане на резултатите 2
|
Инспекторът, провеждащ анализа
|
След приключване на реакцията
|
Отчитането се извършва с просто око, или с вдлъбнато огледало на микроскопа.
|
1 За антиген се използват:
-живи култури от щамове микроорганизми,използвани в хиперимунизацията или при изготвянето на ваксини. Те се посяват на твърди хранителни среди и култивират за 24 часа на 37 С. Агаровите култури се отмиват с физ.разтвор и стандартизират до необходимата гъстота -1, 2 или 3 милярда бактериални тела в 1 мл по Mac Farland;
-убити бактериални суспензии/диагностикуми/ , приготвени чрез химични и термични обработки според термостабилността на антигена / О , Н и К антигени/.
2 При добавянето на равен обем бактериални суспензии към серумните разреждания, се получава удвояване на разреждането, за това крайното отчитане на реакцията е с едно разреждане по-високо. Титърът на серума е максималното разреждане, при което все още всички бактерии са слепени на купчинки на дъното на епруветката, а течността над тях е избистрена.
Ако се използва суспензия от бактерии , на които ресните са разрушени се отчита О аглутинация. Ако се използва суспензия от бактерии, на които соматичният антиген е отстранен се отчита Н аглутинация. При използване на К антигени се отчита К аглутинация.
За изразяване силата на аглутинацията в отделните епруветки се използват следните обозначения:
++++ при пълно избистряне на течността със събиране на всички бактерии във флокули;
+++ при почти пълно избистряне на суспензията, тъй като по-голямата част от бактериите са аглутинирани ;
++ при аглутиниране на около 50% от бактериите, при което мътнината е редуцирана наполовина, в сравнение с контролата;
+ когато течността е мътна, поради аглутинация на малка част от бактериите;
- отрицателна реакция при липса на аглутинати и мътнина подобна на контролата
Разработил:
ИННОВА ЕООД
|
Утвърдил:
(име, подпис)
|
01/06/2009 г.
|
11/06/2009 г.
|
Каталог: SOP%20finalSOP%20final -> Процедурата за калибриране се прилага периодично за да възпроизведе и контролира основните метрологични характеристики на методаSOP%20final -> Hp/Compaq computer system 6GHz piv processor, 512 mb ram, 80 gb hdd, 3SOP%20final -> Цел целта на тази стандартна оперативна процедура е защита на работещите от рискове, свързани с експозиция на биологични агенти при работа с тях. ОбхватSOP%20final -> Цел определя се минималната подтискаща концентрация /мпк/ на даден антибиотик спрямо микроорганизмите. ОбхватSOP%20final -> Цел тази стандартна оперативна процедура регламентира микробиологичния метод за количествено определяне концентрацията на антибиотици. ОбхватSOP%20final -> За оценка на ефикасността на ивмп и определяне напрежението на имунитета в серуми от опитни животниSOP%20final -> Оценка на напрежението на имунитета, чрез свързване на антиген и антитяло и проследяване активността на ивмп, като скрининг тестSOP%20final -> Цел тази стандартна оперативна процедура се прилага за поддържането на референтни бактериални щамове за нуждите на лаборатория Микробиология, чрез препосяването им през определени периоди от време в подходящи хранителни среди обхватSOP%20final -> За контрол на качеството на почистването и дезинфекцията на лабораториите, помощните помещения, облекло и ръце на персонал работещ в тях, редовно се извършват микробиологични изследванияSOP%20final -> Цел целта на тази стандартна оперативна процедура е да опише методът на изследване за откриване на специфични антитела срещу говеждия пестивирус (bvdv) в проби от серум или мляко. Обхват
Сподели с приятели: |