4.2. Помощни материали:
4.3. Консумативи:
Действие
|
От кого се извършва
|
Кога се извършва
|
Как се извършва
|
1. Обособяване на еднослойна или двуслойна структура
|
лаборант
|
В началото на теста
|
Петриеви панички с еднакъв диаметър и равно плоско дъно се разполагат на хоризонтална нивелирана повърхност и в тях се разлива разтопена агарова среда, посята с тест микроорганизъм. По този начин в петриевата паничка се оформя само един слой среда, съдържаща тест микроорганизма.
При анализите на някои антибиотици средата се разлива в два слоя – долен, без тест микроорганизъм, и горен, съдържащ тест-култура. За долен слой може да се използва и агарова среда, по-бедна на хранителни вещества. Долният слой, несъдържащ тест-микроорганизъм, може да се разлее в петриевите панички и след втвърдяване да се съхрани в хладилник при температура 2-80С за 3-5 дни. Хранителната среда в горния слой се посява със съответния тест-микроорганизъм (т.1) и се разлива върху долния агаров слой в деня на извършване на анализа. С физиологичен разтвор от тест-микроорганизмът се изготвя суспензия с определен титър и се внася в средата при температура, не по-висока от 48-500С, а споровите – при 65-700С. Най-удобни за определяне активноста на антибиотиците са спорообразуващите микроорганизми, тъй като спорите може да се съхраняват дълго време без изменение на свойствата.
|
2. Подготовка на ямки
|
лаборант
|
След обособяването на еднослойна или двуслойна структура
|
Всяка паничка се поставя върху разграфен шаблон и с помощта на стерилен тапопробивач се изрязват ямки във втвърдената агарова среда. Те се разполагат на 2 cm от ръба на паничката и на 600 една от друга.
|
3. Нанасяне на разтвора на стандарта в ямките
|
лаборант
|
След подготовката на ямките
|
Разтворът на стандарта се накапва през една в трите ямки, а в останалите три – разтворът на изследвания антибиотик. Накапването се извършва с помоща на автоматична пипета в обем 0,1ml.
|
4. Развитие на тест-микроорганизма
|
лаборант
|
След нанасяне на разтвора в ямките
|
Развитието на тест-микроорганизма се провежда в термостат при 370С ± 20С за 16-18 часа, след което се измерват диаметрите на зоните на инхибиция.
|
5. Отчитане на резултатите
|
Ръководител лаборатория
|
След развитието на тест-микроорганизма
|
Измерване зоните на инхибиция и определяне активността на изпитвания антибиотик се извършва посредством OMNICON® Zone Reader или чрез калибрационна права.
|
5.1. Проверка на използваните материали, метод и апаратура
|
Ръководител лаборатория
|
При несъответствие между аналитичния сертификат за качество и получения резултат
от анализираната проба
|
При несъответствие между аналитичния сертификат за качество и получения резултат
от анализираната проба, се извършва повторно изпитване на същата, след предварителна проверка на използваните материали, метод и апаратура.
|